Plásmido Doble Nickase (h) mTOR: sc-400140-NIC

MTOR codifica la quinasa serina/treonina mTOR, un integrador central de señales de factores de crecimiento, nutrientes, energía y estrés que coordina el metabolismo y la homeostasis celulares. mTOR actúa dentro de mTORC1 y mTORC2 para regular la síntesis de proteínas y el crecimiento celular a través de S6K y 4E-BP1, la autofagia mediante la señalización de ULK1, y la organización del citoesqueleto y las señales de supervivencia a través de las vías de AKT y SGK. La desregulación de la señalización de mTOR se asocia con cambios en la proliferación y la reprogramación metabólica en la biología del cáncer, y contribuye a fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, así como a disfunción cardiometabólica. Dado que mTOR se sitúa en la intersección de las vías PI3K–AKT–mTOR y AMPK, la perturbación de MTOR se utiliza ampliamente para investigar la comunicación cruzada entre vías, las respuestas al estrés y el control de la traducción.

mTOR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MTOR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MTOR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MTOR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MTOR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.