Plásmido Doble Nickase (h) MTBP: sc-404307-NIC

La proteína de unión a Mdm2 (MTBP) es un factor nuclear implicado en el control del inicio de la replicación del ADN y la progresión de la fase S mediante interacciones con proteínas de replicación como Treslin/TICRR y CDC45, favoreciendo el disparo de los orígenes y la estabilidad del genoma. MTBP también se integra con la señalización de los puntos de control del ciclo celular y de la respuesta al estrés, vinculando la dinámica de la replicación con el control de la proliferación. La expresión desregulada de MTBP se ha asociado con una tolerancia alterada al estrés replicativo y con inestabilidad cromosómica observadas en múltiples contextos tumorales, lo que la convierte en un locus útil para estudiar las vías que acoplan la replicación del ADN con programas de crecimiento oncogénico. El análisis funcional de MTBP aporta información sobre los mecanismos que regulan el momento de replicación, la señalización del daño en el ADN y la fidelidad mitótica en células humanas.

MTBP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MTBP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MTBP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MTBP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MTBP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.