Plasmide CRISPR d'Activation (m) MT-MMP-3: sc-421673-ACT

Le gène murin **Mmp16** code **MT‑MMP‑3** (également appelée **MMP16**), une métalloprotéinase matricielle ancrée à la membrane qui assure la protéolyse péricellulaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. En clivant des composants de la matrice et en activant d’autres MMP, telles que la **pro‑MMP2**, MT‑MMP‑3 influence la migration et l’invasion cellulaires ainsi que la morphogenèse tissulaire au sein de réseaux de signalisation dépendants des protéases. Son activité s’articule avec des voies qui régulent les transitions épithélio‑mésenchymateuses, l’adhérence dépendante des intégrines et la biodisponibilité des facteurs de croissance via le renouvellement de la matrice. Une expression dérégulée de **Mmp16** ou un déséquilibre protéolytique a été associé à des contextes de remodelage pathologique, notamment la fibrose, les microenvironnements inflammatoires et des modèles de progression tumorale où la dégradation de la matrice et la motilité cellulaire constituent des phénotypes centraux.

MT-MMP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mmp16 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MT-MMP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mmp16 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mmp16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MT-MMP-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mmp16 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MT-MMP-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MT-MMP-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mmp16 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.