Plasmide CRISPR d'Activation (h) MT-MMP-2: sc-404075-ACT

MMP15 code la métalloprotéinase matricielle ancrée à la membrane MT‑MMP‑2 (MT2‑MMP), une endopeptidase dépendante du zinc qui remodèle la matrice extracellulaire péricellulaire en clivant, à la surface cellulaire, les collagènes, les laminines et d’autres substrats de la matrice. En tant que composante de réseaux de protéases coordonnant le renouvellement des adhésions focales, la migration cellulaire et la croissance invasive, MT2‑MMP influence la signalisation extracellulaire en libérant ou en activant des facteurs liés à la matrice et en modulant la disponibilité des récepteurs. L’activité de MMP15 s’entrecroise avec des voies associées aux intégrines et aux facteurs de croissance qui façonnent la plasticité épithélio‑mésenchymateuse et le remodelage tissulaire. Une expression dérégulée de MT2‑MMP a été associée au renouvellement pathologique de la matrice observé lors de l’invasion tumorale, de la fibrose et dans des microenvironnements inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude des programmes de remodelage pilotés par la protéolyse.

MT-MMP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MMP15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MT-MMP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MMP15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MMP15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MT-MMP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MMP15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MT-MMP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MT-MMP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MMP15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.