MSR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409650

概要

ヒトのMTRRはメチオニン合成酵素レダクターゼ（MSR）をコードしており、FAD/NADPH依存性の酸化還元酵素として、メチオニン合成酵素のコバラミン補因子を還元的に再活性化することで、その触媒活性を回復させます。この役割を通じてMSRはワンカーボン代謝を支え、葉酸回路とメチオニン回路を、S-アデノシルメチオニン（SAM）依存性のメチル化反応およびホモシステインの再メチル化と結び付けています。MTRRの機能破綻は、酸化還元依存的な酵素維持機構を乱し、細胞のメチル化能、ヌクレオチド生合成、代謝ストレス応答を変化させ得ます。遺伝的多型やMSR機能低下は、ホモシステイン処理の異常や葉酸関連の代謝表現型と関連づけられており、発生生物学や心代謝リスクの研究において重要な意義を持つことが示されています。

MSR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMTRR遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MTRR内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MTRRのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MSRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MSRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MTRR欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MSRの機能に不可欠なMTRRエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MTRRゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MSR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMSR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MTRR遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MSR HDRプラスミド（h）および MSR HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMTRRホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMTRR標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。