Plasmide CRISPR d'Activation (h) MRP6: sc-402219-ACT

ABCC6 code le transporteur de la famille ABC MRP6, une pompe d’efflux membranaire principalement exprimée dans le foie et le rein, qui régule l’homéostasie extracellulaire des nucléotides et des métabolites. En contrôlant la libération d’ATP et la production extracellulaire subséquente de pyrophosphate, MRP6 contribue à l’équilibre de la minéralisation et à l’intégrité des tissus conjonctifs, reliant l’activité du transporteur à la signalisation purinergique et aux voies des ectonucléotidases. La perte de fonction ou la diminution d’expression d’ABCC6 est fortement associée à des phénotypes de calcification ectopique, notamment le pseudoxanthome élastique et des troubles héréditaires apparentés de la minéralisation. Ces associations, fondées sur la biologie, font d’ABCC6 une cible précieuse pour étudier les régulateurs systémiques de la calcification, les réseaux de transport hépatiques et les mécanismes de remodelage de la matrice extracellulaire.

MRP6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCC6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MRP6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCC6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCC6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MRP6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCC6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MRP6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MRP6 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCC6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.