MRP5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402443-NIC

ABCC5 はヒトの ATP 結合カセット（ABC）トランスポーターである MRP5 をコードしており、細胞膜に局在する排出ポンプとして、環状ヌクレオチド（cGMP、cAMP）を含む有機アニオンや、さまざまなヌクレオチド類似体を細胞外へ輸送します。MRP5 は細胞内の環状ヌクレオチド量を調節することで、セカンドメッセンジャーシグナル伝達を制御し、その下流でタンパク質キナーゼ活性、イオンチャネル調節、ならびに細胞増殖やストレス応答に影響する転写プログラムに作用します。ABCC5 の活性は、外因性化合物（キセノバイオティクス）や代謝拮抗薬の細胞内動態を変化させることを通じて薬理学・毒性学とも関連し、機能異常は多剤耐性の表現型やがん関連シグナルの文脈と結び付けられています。これらの特性により、ABCC5/MRP5 はトランスポーター生物学、環状ヌクレオチド恒常性、化合物感受性の機構を検討するうえで重要な標的となります。

MRP5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ABCC5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ABCC5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ABCC5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ABCC5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。