Plásmido Doble Nickase (h) MRP5: sc-402443-NIC

ABCC5 codifica el transportador humano de la familia ABC MRP5, una bomba de eflujo de membrana plasmática que exporta aniones orgánicos, incluidos nucleótidos cíclicos (cGMP y cAMP) y diversos análogos de nucleótidos. Al regular las reservas intracelulares de nucleótidos cíclicos, MRP5 modula la señalización de segundos mensajeros con efectos posteriores sobre la actividad de quinasas de proteínas, la regulación de canales iónicos y programas de transcripción que influyen en la proliferación celular y en las respuestas al estrés. La actividad de ABCC5 se relaciona con la farmacología y la toxicología por la alteración del manejo celular de xenobióticos y antimetabolitos, y su desregulación se ha asociado con fenotipos de resistencia a múltiples fármacos y con contextos de señalización vinculados al cáncer. Estas propiedades convierten a ABCC5/MRP5 en un objetivo relevante para investigar la biología de transportadores, la homeostasis de nucleótidos cíclicos y los mecanismos de sensibilidad a compuestos.

MRP5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ABCC5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ABCC5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ABCC5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ABCC5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.