MRCKβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403169

概要

CDC42BPB は、Rho GTPase である CDC42 の下流でアクチン–ミオシン収縮性を協調的に制御するセリン/スレオニンキナーゼ、MRCKβ（myotonic dystrophy kinase-related Cdc42-binding kinase beta）をコードします。MRCKβ はミオシン軽鎖などの細胞骨格制御因子をリン酸化し、Rho/ROCK 関連のシグナル伝達ネットワークを介して、細胞極性、ラメリポディア形成、方向性移動に影響を与えます。これらの作用により CDC42BPB は、接着ダイナミクス、形態形成、ならびに小胞輸送を制御する経路と結び付きます。これらのプロセスは、浸潤性や転移性の表現型でしばしば破綻します。MRCKβ シグナルの変化は、腫瘍細胞の運動性や、細胞骨格制御異常を伴うその他の疾患との関連で研究されています。

MRCKβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDC42BPB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDC42BPB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDC42BPBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MRCKβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MRCKβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDC42BPB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MRCKβの機能に不可欠なCDC42BPBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDC42BPBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MRCKβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMRCKβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDC42BPB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MRCKβ HDRプラスミド（h）および MRCKβ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDC42BPBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDC42BPB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。