Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MRCKβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403169
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MRCKβ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MRCKβ, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MRCKβ Antibody (C-12): sc-374597
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MRCKβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403169 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CDC42BPB codifica MRCKβ (myotonic dystrophy kinase-related Cdc42-binding kinase beta), una chinasi serina/treonina che agisce a valle della GTPasi Rho CDC42 per coordinare la contrattilità actina–miosina. MRCKβ fosforila regolatori del citoscheletro, inclusa la catena leggera della miosina, e influenza la polarità cellulare, la formazione di lamellipodi e la migrazione direzionale attraverso reti di segnalazione correlate a Rho/ROCK. Queste attività collegano CDC42BPB a vie che governano la dinamica dell’adesione, la morfogenesi e il traffico vescicolare, processi spesso alterati nei fenotipi invasivi e metastatici. Alterazioni della segnalazione di MRCKβ sono state studiate nel contesto della motilità delle cellule tumorali e di altri disturbi che coinvolgono una disregolazione del citoscheletro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MRCKβ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDC42BPB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDC42BPB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDC42BPB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MRCKβ.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDC42BPB per lo studio della segnalazione di MRCKβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CDC42BPB critici per la funzione di MRCKβ
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDC42BPB per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MRCKβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MRCKβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDC42BPB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MRCKβ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MRCKβ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDC42BPB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDC42BPB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.