mPRα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402143-ACT

PAQR7は膜型プロゲステロン受容体α（mPRα）をコードしており、細胞膜における迅速な非ゲノム型プロゲステロンシグナル伝達に関与するとされるPAQRファミリーの一員です。mPRαは、cAMP動態やそれに続くキナーゼ経路など、細胞増殖・分化・生存プログラムに影響するGタンパク質共役型のシグナル伝達の調節と関連づけられています。ヒト組織では、PAQR7の発現は内分泌調節やステロイド応答性の細胞状態と関連しており、ホルモン依存的な転写ネットワークや膜起点のシグナル間クロストークを研究する上で重要です。PAQR7が関与するプロゲステロンシグナル伝達経路の破綻は、生殖生物学やホルモン関連疾患のメカニズムの文脈で検討されており、細胞シグナル伝達および機能ゲノミクス研究における研究標的としての有用性が示されています。

mPRα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAQR7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mPRα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAQR7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAQR7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mPRαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAQR7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmPRα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAQR7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmPRα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。