Plasmide CRISPR d'Activation (h) mPRα: sc-402143-ACT

PAQR7 code le récepteur membranaire de la progestérone alpha (mPRα), membre de la famille PAQR impliquée dans la signalisation rapide et non génomique de la progestérone au niveau des membranes cellulaires. mPRα a été associé à la modulation de voies de signalisation couplées aux protéines G, notamment la dynamique de l’AMPc et des cascades de kinases en aval qui influencent les programmes de prolifération, de différenciation et de survie cellulaires. Dans les tissus humains, l’expression de PAQR7 est liée à la régulation endocrinienne et à des états cellulaires sensibles aux stéroïdes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réseaux transcriptionnels dépendants des hormones et du dialogue entre voies de signalisation initiées à la membrane. Des dérégulations des voies de signalisation de la progestérone impliquant PAQR7 ont été étudiées dans le contexte de la biologie de la reproduction et des mécanismes de maladies associées aux hormones, ce qui soutient son utilisation comme cible de recherche en signalisation cellulaire et en génomique fonctionnelle.

mPRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PAQR7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

mPRα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PAQR7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PAQR7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de mPRα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PAQR7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de mPRα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie mPRα dans les cellules tumorales présentant une expression de PAQR7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.