Plasmide CRISPR d'Activation (h) MPP3: sc-407044-ACT

La MPP3 humaine (membrane palmitoylated protein 3), également appelée membre 3 de la sous-famille MAGUK p55, est une protéine d’échafaudage de la famille des guanylate kinases associées à la membrane, qui contribue à organiser des complexes protéiques à la membrane plasmique. Grâce à ses domaines PDZ, SH3 et GK, MPP3 favorise l’assemblage de composants jonctionnels et de signalisation qui régulent la polarité épithéliale, l’adhésion cellule–cellule et le couplage au cytosquelette. Ces fonctions situent MPP3 au sein de voies contrôlant la stabilité des jonctions et le trafic membranaire, des processus fréquemment altérés lors de la progression tumorale et des métastases. Une expression ou une localisation dérégulée des protéines d’échafaudage MAGUK, dont MPP3, a été associée à des modifications de l’intégrité de la barrière et des sorties de signalisation pertinentes pour la biologie du cancer et l’homéostasie tissulaire.

MPP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MPP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MPP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MPP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MPP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MPP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MPP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MPP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MPP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MPP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.