Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mnk2: sc-401879-ACT

Le gène humain **MKNK2** code la **kinase sérine/thréonine interagissant avec les MAP kinases 2 (Mnk2)**, un effecteur en aval des voies de signalisation **ERK** et **p38 MAPK** qui module l’initiation de la traduction en phosphorylant **eIF4E** et des substrats apparentés. En reliant des signaux extracellulaires à la traduction de l’ARNm dépendante de la coiffe, Mnk2 influence des programmes d’expression génique qui contrôlent la croissance cellulaire, les réponses au stress et la différenciation. Une dérégulation de l’axe **MAPK–Mnk–eIF4E** a été associée à une altération du contrôle traductionnel en cancérologie, en inflammation et en neurobiologie, faisant de **MKNK2** un nœud d’intérêt pour étudier la synthèse protéique dépendante des stimuli. La régulation spécifique des isoformes et la localisation subcellulaire de Mnk2 renforcent encore l’intérêt d’explorer une signalisation dépendante du contexte et le remodelage des programmes de traduction.

Mnk2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MKNK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mnk2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MKNK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MKNK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mnk2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MKNK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mnk2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mnk2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MKNK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.