Plásmido CRISPR de Activación (h) MN1: sc-404347-ACT

MN1 (meningioma 1) codifica un correagulador transcripcional que modula programas de expresión génica implicados en la diferenciación hematopoyética y la proliferación celular. MN1 interactúa con redes de receptores nucleares y coactivadores, influyendo en el control transcripcional asociado a la cromatina y en las salidas transcripcionales específicas de linaje. La expresión desregulada de MN1 se asocia estrechamente con la biología de las neoplasias mieloides, en las que estados transcripcionales alterados contribuyen al mantenimiento aberrante de progenitores y a una diferenciación deficiente. Como regulador nuclear, MN1 se estudia con frecuencia en el contexto de complejos de factores de transcripción y circuitos de regulación génica que determinan decisiones de destino celular.

MN1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MN1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MN1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MN1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MN1 en células tumorales con expresión de MN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.