Plasmide CRISPR d'Activation (h) MMP9: sc-400083-ACT

Le gène humain **MMP9** code la métalloprotéinase matricielle 9 (MMP-9), une endopeptidase sécrétée dépendante du zinc qui dégrade des composants de la matrice extracellulaire tels que le collagène de type IV et régule le remodelage de la membrane basale. Son activité influence la migration cellulaire, l’angiogenèse et le trafic des leucocytes en façonnant l’environnement protéolytique péricellulaire et en libérant ou en activant des facteurs de croissance et des cytokines liés à la matrice. MMP9 s’intègre aux réseaux de signalisation inflammatoire et aux programmes d’organisation de la matrice extracellulaire, et recoupe des voies qui contrôlent la dynamique épithélio-mésenchymateuse et la réparation tissulaire. Une expression et une activité dérégulées de MMP9 sont fréquemment étudiées dans l’invasion et les métastases cancéreuses, les maladies inflammatoires chroniques, le remodelage cardiovasculaire et la neuroinflammation.

MMP9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MMP9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MMP9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MMP9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MMP9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MMP9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MMP9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MMP9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MMP9 dans les cellules tumorales présentant une expression de MMP9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.