Plasmide CRISPR d'Activation (m) MMP-13: sc-421670-ACT

Mmp13 code pour la métalloprotéinase matricielle 13 (MMP‑13), une collagénase sécrétée qui clive les collagènes fibrillaires et d’autres substrats de la matrice extracellulaire afin de réguler le remodelage tissulaire. Chez la souris, MMP‑13 est induite par des signaux inflammatoires et mécaniques et s’intègre à des programmes pilotés par les cytokines impliquant les voies de signalisation MAPK et NF‑κB, contribuant à des cascades de protéases qui modulent la migration cellulaire, la différenciation et le renouvellement de la matrice. Une activité dérégulée de MMP‑13 a été associée aux processus de remodelage du cartilage et de l’os, et elle est fréquemment étudiée dans des modèles d’arthrose, d’inflammation associée à l’arthrite, de remodelage du microenvironnement tumoral et de fibrose. Comme MMP‑13 remanie l’architecture de la matrice extracellulaire, elle est également utilisée comme indicateur de l’hypertrophie des chondrocytes et de la différenciation ostéogénique en recherche musculosquelettique.

MMP-13 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mmp13 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MMP-13 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mmp13 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mmp13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MMP-13. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mmp13 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MMP-13 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MMP-13 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mmp13 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.