MMP-10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403174-ACT

マトリックスメタロプロテイナーゼ10（MMP-10；ストロメリシン-2）は、亜鉛依存性の分泌型エンドペプチダーゼであり、プロテオグリカン、ラミニン、フィブロネクチンなどの細胞外マトリックス（ECM）成分を切断することでECMを再構築します。また、他のMMPを活性化して、プロテアーゼ反応カスケードを増幅させることもあります。MMP-10の活性は、細胞接着、遊走、上皮—間葉動態、ならびに組織修復プログラムに影響を与え、細胞外からの刺激を炎症シグナルと統合します。MMP-10の発現は、NF-κBやMAPK/AP-1を含むサイトカインおよび増殖因子経路の下流で制御されることが多く、創傷治癒や間質リモデリングの文脈と結び付いています。MMP-10の制御破綻は、炎症性疾患、線維化に関連する過程、腫瘍関連微小環境のリモデリングなどで見られる病的なマトリックス代謝回転と関連しており、疾患関連モデルにおける機序的マーカーとしての利用を支持します。

MMP-10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MMP-10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MMP-10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMMP-10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMMP-10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。