MMP-10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403174-ACT

Matrix-Metalloproteinase-10 (MMP-10; Stromelysin-2) ist eine sekretierte, zinkabhängige Endopeptidase, die die extrazelluläre Matrix durch Spaltung von Proteoglykanen, Laminin, Fibronectin und weiteren Matrixbestandteilen umgestaltet und zudem zusätzliche MMPs aktivieren kann, um proteolytische Kaskaden zu verstärken. Ihre Aktivität beeinflusst Zelladhäsion, Migration, epithelial–mesenchymale Dynamiken und Programme der Gewebereparatur und verknüpft extrazelluläre Signale mit entzündlicher Signalübertragung. Die Expression von MMP-10 wird häufig nachgeschaltet von Zytokin- und Wachstumsfaktor-Signalwegen reguliert, darunter NF-κB und MAPK/AP-1, was sie mit Wundheilungs- und Stromaremodellierungs-Kontexten verbindet. Eine fehlregulierte MMP-10 wurde mit pathologischem Matrixumsatz in Verbindung gebracht, wie er bei entzündlichen Erkrankungen, fibroseassoziierten Prozessen und der Umgestaltung des tumorassoziierten Mikromilieus beobachtet wird, was ihren Einsatz als mechanistischen Marker in krankheitsrelevanten Modellen unterstützt.

MMP-10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen -Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MMP-10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des -Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MMP-10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native -Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MMP-10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MMP-10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem -Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.