MLN64 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405166

Visão geral

STARD3 codifica a MLN64, uma proteína de membrana de endossomos tardios/lisossomos que contém um domínio START, o qual medeia o transporte intracelular de colesterol. A MLN64 contribui para o tráfego de esteróis a partir dos endossomos em direção a locais de esteroidogénese e de biogénese de membranas, ligando o processamento endocítico de lípidos à utilização mitocondrial de colesterol e a redes mais amplas de homeostase lipídica. Por meio dos seus efeitos na distribuição de colesterol e na dinâmica de contactos entre organelos, a atividade de STARD3 cruza-se com vias que controlam a composição de membranas, a compartimentalização da sinalização e as respostas celulares ao stress. A desregulação da expressão de STARD3 tem sido associada a alterações no metabolismo lipídico e tem sido estudada no contexto de fenótipos proliferativos e metabólicos relevantes para a biologia do cancro e para a neurodegeneração.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MLN64 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene STARD3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do STARD3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do STARD3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MLN64.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de STARD3 para a investigação da sinalização de MLN64, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) STARD3 críticos para a função MLN64
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos STARD3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MLN64 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MLN64 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus STARD3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MLN64 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MLN64 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia STARD3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo STARD3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.