Plasmide CRISPR d'Activation (h) MLK2: sc-406968-ACT

Le gène humain **MAP3K10** code la **mixed lineage kinase 2 (MLK2)**, une MAP kinase kinase kinase qui intègre des signaux en amont provenant de petites GTPases et de signaux de stress afin de relayer des cascades de phosphorylation. MLK2 est un régulateur clé de la signalisation MAPK, en particulier des voies **JNK** et **p38**, en modulant des programmes transcriptionnels qui contrôlent l’apoptose, les réponses inflammatoires et la différenciation neuronale. Via ces nœuds de signalisation, MLK2 influence la dynamique du cytosquelette et l’adaptation cellulaire au stress, des processus fréquemment étudiés en biologie du cancer et en recherche sur les maladies neurodégénératives. Une activité dérégulée de MAP3K10 a été associée à une signalisation aberrante activée par le stress et à des voies de survie altérées, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du remodelage des voies de signalisation.

MLK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP3K10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MLK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP3K10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP3K10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MLK2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP3K10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MLK2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MLK2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP3K10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.