Plasmide Double Nickase (m) MLH1: sc-421660-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) MLH1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MLH1 Double Nickase (m) et le plasmide MLH1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Mlh1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MLH1 Antibody (B-12): sc-271978
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) MLH1 | sc-421660-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) MLH1 | sc-421660-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mlh1 code pour MLH1, un composant central de la machinerie de réparation des mésappariements de l’ADN (MMR), qui protège l’intégrité du génome en corrigeant les mésappariements base–base et les boucles d’insertion–délétion apparaissant lors de la réplication de l’ADN. MLH1 agit au sein des complexes MutL, en coordination avec les homologues de MutS, pour coupler la reconnaissance des mésappariements à l’excision puis à la resynthèse ; il participe également à la signalisation des dommages à l’ADN et au traitement des intermédiaires de recombinaison. Dans les cellules murines, une activité MLH1 altérée augmente la mutagénèse associée à la réplication et l’instabilité des microsatellites, reliant les défauts de la MMR à des phénotypes d’instabilité génomique largement utilisés en biologie du cancer et en recherche sur la réparation de l’ADN. En conséquence, Mlh1 est fréquemment étudié dans les voies qui régissent l’accumulation des mutations, les réponses aux points de contrôle et le maintien du génome.
MLH1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mlh1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mlh1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mlh1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mlh1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.