MLF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417753

概要

骨髄性白血病因子1（MLF1）は、細胞質と核の両方に局在し、転写プログラムや細胞周期制御に影響するタンパク質間相互作用に関与する、造血細胞の運命決定に関わる保存性の高い制御因子である。MLF1は骨髄系分化やストレス応答性シグナル伝達との関連が報告されており、系譜が定まった細胞において、アポトーシス感受性や増殖能を調節する役割を担うとされている。MLF1の発現変化や局在異常は、分化および増殖のチェックポイントが破綻する白血病性形質転換の状況を含め、造血器悪性腫瘍の生物学と関連づけられてきた。その結果、MLF1は、ヒト細胞における転写制御と増殖・分化を結び付ける経路を研究するうえで有用な結節点となっている。

MLF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMLF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MLF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MLF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MLF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MLF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MLF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MLF1の機能に不可欠なMLF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MLF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MLF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMLF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MLF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MLF1 HDRプラスミド（h）および MLF1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMLF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMLF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。