MKP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405872

概要

DUSP9は、二重特異性ホスファターゼ9（MKP-4）をコードしており、活性化したMAPキナーゼ上のスレオニンおよびチロシン残基を脱リン酸化することで、シグナル出力を減弱させるMAPKホスファターゼです。MKP-4はERKおよびp38カスケードの負のフィードバック制御に関与し、細胞増殖、分化、ならびにストレス応答性の転写プログラムに影響を与えます。MAPK経路の持続時間と振幅を制限することで、DUSP9は複数の組織コンテキストにおける炎症性シグナル伝達と細胞運命決定の調節に寄与します。DUSP9/MKP-4活性の破綻は、がん生物学、代謝制御、炎症性疾患モデルで観察されるMAPKシグナル異常表現型と関連づけられており、機序解明を目的とした経路研究において重要です。

MKP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDUSP9遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DUSP9内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DUSP9のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MKP-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MKP-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DUSP9欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MKP-4の機能に不可欠なDUSP9エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DUSP9ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MKP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMKP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DUSP9遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MKP-4 HDRプラスミド（h）および MKP-4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDUSP9ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDUSP9標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。