MK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421609

概要

Mdkはミドカイン（MK）をコードしており、MKは分泌性のヘパリン結合性増殖因子として、発生過程および組織リモデリングの際に、細胞増殖・生存・遊走・神経突起伸長を制御します。MKは細胞表面のプロテオグリカンや受容体複合体を介してシグナルを伝達し、MAPK/ERKやPI3K/AKT、炎症性ケモカインネットワークに関連する経路を調節することで、血管新生や細胞外マトリックスとの相互作用に影響を与えます。マウスモデルでは、Mdk発現の変化が免疫細胞リクルートの異常や不適切な修復応答と関連し、炎症・線維化・腫瘍関連ストローマのシグナル伝達研究において重要な知見を与えます。さらにMKは神経系のパターニングや損傷応答にも寄与するため、神経炎症や再生過程を検討する上で有用な分子標的となります。

MK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMdk遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mdk内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mdkのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mdk欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MKの機能に不可欠なMdkエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mdkゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mdk遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MK HDRプラスミド（m）および MK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMdkホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMdk標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。