mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401694

概要

FTMT はミトコンドリア・フェリチンをコードしており、これはミトコンドリア・マトリックスに局在する鉄貯蔵タンパク質です。過剰な鉄を隔離して、鉄によって駆動される活性酸素種（ROS）の産生を抑制します。FTMT は可動性鉄（ラビル鉄）プールを緩衝することで、ミトコンドリアのレドックス恒常性、酸化的リン酸化の健全性、ならびに代謝・酸化ストレスに対する細胞応答に影響します。その機能は鉄代謝やヘム／鉄‐硫黄（Fe–S）クラスターの生物学とも交差しており、ミトコンドリア機能をより広範な鉄取扱い経路と結び付けています。FTMT 発現の異常は、鉄蓄積の変化や酸化障害の表現型と関連づけられており、神経変性、貧血関連ストレス応答、ミトコンドリア機能不全のモデルにおいて重要性が示されています。

mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFTMT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FTMT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FTMTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、mitochondrial ferritinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、mitochondrial ferritinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FTMT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• mitochondrial ferritinの機能に不可欠なFTMTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FTMTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびmitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FTMT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  mitochondrial ferritin HDRプラスミド（h）および mitochondrial ferritin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFTMTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFTMT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。