MiRP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418462

Visão geral

KCNE2 codifica o peptídeo humano relacionado a MinK 1 (MiRP1), uma subunidade β transmembrana de passagem única que modula a função de canais de potássio dependentes de voltagem, incluindo KCNH2/hERG, ajustando o gating do canal, o tráfego intracelular e a repolarização da membrana. Por meio de seus efeitos sobre a duração do potencial de ação cardíaco e o transporte iônico epitelial, o MiRP1 contribui para a excitabilidade elétrica e a homeostase de eletrólitos em tecidos como o coração e o epitélio gastrointestinal. A perturbação da regulação de canais dependente de KCNE2 está associada à alteração da reserva de repolarização e à suscetibilidade a arritmias, e também tem sido estudada em relação à fisiologia da tireoide e do estômago. Como subunidade moduladora, o MiRP1 oferece um ponto de entrada mecanístico para dissecar complexos macromoleculares de canais iônicos, o controle de qualidade de proteínas de membrana e mudanças na excitabilidade dependentes de estímulo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MiRP1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KCNE2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KCNE2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KCNE2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MiRP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KCNE2 para a investigação da sinalização de MiRP1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KCNE2 críticos para a função MiRP1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KCNE2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MiRP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MiRP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KCNE2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MiRP1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MiRP1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KCNE2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KCNE2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.