Mindin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417294

概要

SPON2は、分泌性の細胞外マトリックス糖タンパク質であるマインディン（mindin）をコードしており、自然免疫の感知と細胞—マトリックス相互作用を結び付けるパターン認識分子および接着分子として機能します。マインディンは微生物成分やインテグリン受容体に結合し、白血球の動員、マクロファージの活性化、さらにNF-κBなどの炎症性シグナル伝達経路および下流のサイトカインネットワークの調節を支えます。間質および血管の微小環境において、SPON2は細胞外マトリックスの組織化、走化性勾配、組織リモデリング過程に寄与し、腫瘍—免疫相互作用に影響を与えます。SPON2発現の異常は複数の炎症性および腫瘍形成関連の状況で報告されており、免疫監視、線維化に伴うリモデリング、ならびに微小環境シグナル伝達の機構研究において重要な標的となります。

Mindin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPON2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPON2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPON2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Mindinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Mindinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPON2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Mindinの機能に不可欠なSPON2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPON2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Mindin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMindin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPON2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Mindin HDRプラスミド（h）および Mindin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPON2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPON2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。