Midasin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411690-ACT

Das humane Gen **MDN1** kodiert **Midasin**, eine große AAA+-ATPase, die für die späte Biogenese der 60S-ribosomalen Untereinheit essenziell ist. Midasin nutzt ATP-getriebenes Remodeling, um während der nukleolären und nukleoplasmatischen Reifung die Freisetzung von Assemblierungsfaktoren und die Qualitätskontrolle zu koordinieren, und verknüpft so die Ribosomenproduktion mit Zellzyklusprogression und Proteostase. Über seine Rolle bei der Ribosomenassemblierung beeinflusst MDN1 die globale Translationskapazität und zelluläre Stressantworten, einschließlich der Signalübertragung bei nukleolärem Stress. Störungen von Ribosomenbiogenesewegen unter Beteiligung von MDN1 sind relevant für mechanistische Untersuchungen der Wachstumskontrolle und für Erkrankungen, die mit fehlerhafter ribosomaler Assemblierung einhergehen.

Midasin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MDN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Midasin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MDN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MDN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Midasin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MDN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Midasin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Midasin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MDN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.