MIA2 Double Nickase Plasmid (h): sc-418205-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MIA2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MIA2 Double-Nickase-Plasmid (h) und MIA2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MIA2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MIA2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MIA2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIA2 (Melanoma Inhibitory Activity Family Member 2) kodiert ein großes Protein des sekretorischen Weges, das im endoplasmatischen Retikulum und im Golgi-Apparat angereichert ist und den intrazellulären Transport sowie die Sekretion spezifischer Cargo-Proteine unterstützt. Es ist an der ER-Homöostase und der Proteinprozessierung beteiligt und verknüpft die MIA2-Aktivität mit Signalwegen wie ER-Stressantworten, vesikelvermitteltem Transport und der Regulation extrazellulärmatrix-assoziierter Signalgebung. Eine veränderte MIA2-Expression wurde bei mehreren Malignomen und Lebererkrankungen beschrieben, was mit Rollen in der Tumorzell-Differenzierung, invasionsbezogenen Veränderungen des Sekretoms und dem Umbau von Lebergewebe vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen MIA2 zu einem nützlichen Ziel, um die Regulation sekretorischer Netzwerke zu untersuchen und zu verstehen, wie Transportdefekte zelluläre Phänotypen beeinflussen.
MIA2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MIA2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MIA2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MIA2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MIA2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.