Mfn2/Mitofusin 2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400536-LAC

MFN2 kodiert Mitofusin 2 (Mfn2), eine dynaminähnliche GTPase in der äußeren Mitochondrienmembran, die die mitochondriale Fusion vermittelt und zur Aufrechterhaltung der Architektur des mitochondrialen Netzwerks beiträgt. Über die Fusion hinaus ist Mfn2 an Kontaktstellen zwischen Mitochondrien und endoplasmatischem Retikulum beteiligt und beeinflusst dadurch den Kalziumaustausch, den Lipidtransfer sowie die Abstimmung der oxidativen Phosphorylierung mit dem zellulären Energiebedarf. Durch diese Funktionen wirkt sich MFN2 auf Mitophagie, Redox-Homöostase und stressantwortliche Signalwege aus, die das Überleben der Zelle und die metabolische Anpassung prägen. Eine dysregulierte MFN2-Aktivität wurde mit Neuropathien und umfassenderen Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was MFN2 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Organellendynamik in krankheitsrelevanten Modellen macht.

Mfn2/Mitofusin 2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MFN2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Mfn2/Mitofusin 2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MFN2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Mfn2/Mitofusin 2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MFN2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.