MFG-E8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402282-ACT

Das humane Gen **MFGE8** kodiert Milk-Fat-Globule-EGF-Faktor 8 (MFG‑E8), ein sezerniertes Glykoprotein, das an Phosphatidylserin auf apoptotischen Zellen bindet und diese über Integrine wie αvβ3 und αvβ5 mit Phagozyten verbindet. Dadurch fördert es die Efferozytose und die Auflösung von Entzündungen. Über die Regulation der Beseitigung apoptotischer Zellen beeinflusst MFG‑E8 die angeborene Immun-Signalgebung, den Gewebeumbau und die Polarisierung von Makrophagen, mit nachgelagerten Effekten auf den Zytokin-Grundtonus und die Homöostase der extrazellulären Matrix. Die Aktivität von **MFGE8** überschneidet sich mit Programmen der Angiogenese und Wundheilung und wird häufig im Kontext chronischer Entzündung, Fibrose und der Biologie des Tumormikromilieus untersucht, wo eine gestörte Clearance oder veränderte stromale Signalgebung zu krankheitsassoziierten Phänotypen beitragen kann.

MFG-E8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MFGE8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MFG-E8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MFGE8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MFGE8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MFG-E8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MFGE8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MFG-E8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MFG-E8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MFGE8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.