Mex3c CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408878-ACT

Humanes MEX3C kodiert Mex3c, ein RNA-bindendes Protein mit KH-Domänen und einem RING-Finger vom Typ C3H1, das die posttranskriptionelle Genregulation durch sequenzselektive mRNA-Bindung, Lokalisation und Kontrolle der Stabilität unterstützt. Mex3c ist an Netzwerken des RNA-Stoffwechsels beteiligt, die Translationsprogramme und die zelluläre Differenzierung beeinflussen, und verbindet damit Proteostase und Signalanpassung unter sich verändernden metabolischen Zuständen. Berichtet wurden funktionelle Zusammenhänge, darunter die Regulation des mRNA-Umsatzes sowie ubiquitinassoziierte Prozesse, die Zellwachstum und Stressantworten prägen. Eine dysregulierte MEX3C-Expression wurde in krankheitsrelevanten Transkriptionssignaturen beobachtet, was seine Untersuchung in Mechanismen unterstützt, die metabolischer Dysfunktion und einer krebsassoziierten Umgestaltung der RNA-Regulation zugrunde liegen.

Mex3c Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MEX3C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Mex3c Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MEX3C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MEX3C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Mex3c-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MEX3C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Mex3c-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Mex3c-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MEX3C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.