METTL6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416547-NIC

METTL6は、RNA修飾に関与するとされるS-アデノシル-L-メチオニン（SAM）依存性メチルトランスフェラーゼをコードしており、翻訳の正確性やプロテオームの産生量に影響し得る、特定の細胞質tRNAに対する活性が報告されています。tRNAメチル化パターンを形成することを通じて、METTL6は翻訳制御、プロテオスタシス、ストレス適応といった細胞過程と関連し、二次的に増殖や分化のプログラムにも影響し得ます。tRNAメチルトランスフェラーゼを含むRNA修飾酵素の機能不全は、ヒト疾患の文脈で増殖表現型の変化やトランスクリプトームからプロテオームへの連関の変調と関連づけられており、METTL6は機序解明研究の標的として重要です。ヒト細胞モデルにおいてMETTL6を攪乱することで、tRNAのエピトランスクリプトーム修飾が遺伝子発現制御や細胞状態の遷移とどのように結びつくのかを検証できます。

METTL6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における METTL6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、METTL6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、METTL6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、METTL6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。