METTL5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418556

概要

METTL5はSAM依存性RNAメチルトランスフェラーゼをコードしており、18S rRNA上へのN6-メチルアデノシン（m6A）付加を触媒することで、リボソームの構造と翻訳出力の形成に寄与します。この修飾はリボソーム生合成や、細胞増殖およびストレス適応を支えるタンパク質合成プログラムの微調整と関連しています。METTL5活性を含むrRNAメチル化機構の制御異常は、神経発達表現型やがん関連の遺伝子発現状態で観察される翻訳制御の変化と結び付けられています。そのためMETTL5は、RNAエピジェネティクスとプロテオスタシス、細胞周期進行、分化をつなぐ経路において研究されています。

METTL5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMETTL5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、METTL5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、METTL5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、METTL5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、METTL5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、METTL5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• METTL5の機能に不可欠なMETTL5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、METTL5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• METTL5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMETTL5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、METTL5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  METTL5 HDRプラスミド（h）および METTL5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMETTL5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMETTL5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。