Plásmido CRISPR de Activación (h) MEK-5: sc-401688-ACT

MAP2K5 codifica la quinasa quinasa 5 de proteínas activadas por mitógenos (MEK-5), una quinasa de doble especificidad que actúa como el principal activador aguas arriba de ERK5 (MAPK7) en el eje de señalización MEK5–ERK5. Esta vía integra señales de factores de crecimiento y de estrés para regular programas transcripcionales que controlan la proliferación, la diferenciación, la supervivencia y la dinámica del citoesqueleto, con funciones descritas en la biología vascular y la migración celular. La señalización MEK-5–ERK5 se entrecruza con el control dependiente de MAPK de la expresión de genes de respuesta inmediata y puede influir en las respuestas a estímulos oxidativos e inflamatorios. La desregulación de la actividad de MAP2K5/ERK5 se ha asociado con contextos alterados de señalización oncogénica, fenotipos relacionados con el sistema cardiovascular y otras afecciones en las que la reconfiguración de la red de MAPK contribuye a estados celulares relevantes para la enfermedad.

MEK-5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAP2K5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MEK-5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAP2K5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAP2K5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MEK-5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAP2K5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MEK-5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MEK-5 en células tumorales con expresión de MAP2K5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.