Particules Lentivirales d'Activation (h) megalin/LRP2: sc-401094-LAC

LRP2 code la mégaline, un grand membre endocytaire de la famille des récepteurs des LDL, qui agit à la membrane plasmique comme récepteur « éboueur » multi‑ligands et comme transporteur. La mégaline assure l’internalisation et le trafic dépendants de la clathrine d’une grande diversité de cargos, notamment des protéines liant les vitamines, des lipoprotéines et des morphogènes, contribuant ainsi à la réabsorption épithéliale et à l’homéostasie des nutriments. Par ses interactions avec des protéines adaptatrices et des corécepteurs, LRP2 influence le tri endosomal, le recyclage des récepteurs et des nœuds de signalisation en aval tels que Sonic hedgehog et des voies apparentées au TGF‑β. Des altérations de l’expression ou de la fonction de LRP2 ont été associées à des phénotypes du développement et à des dysfonctions spécifiques de certains tissus, ce qui étaye son utilisation comme cible mécanistique dans l’étude de la biologie épithéliale et du transport médié par les récepteurs.

Les particules d'activation lentivirales megalin/LRP2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LRP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales megalin/LRP2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LRP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de megalin/LRP2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LRP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.