Med8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404402

Panoramica

MED8 codifica Med8, una subunità conservata del complesso Mediator che fa da ponte tra i fattori di trascrizione specifici di sequenza e l’RNA polimerasi II, coordinando l’avvio e l’allungamento della trascrizione. Grazie al suo ruolo nell’integrità del Mediator e nella comunicazione tra promotori ed enhancer, MED8 contribuisce alla regolazione della progressione del ciclo cellulare, dei programmi di differenziamento e dell’espressione genica in risposta allo stress. La perturbazione dei componenti del Mediator può rimodellare le reti trascrizionali che influenzano la stabilità genomica e lo stato metabolico, rendendo MED8 rilevante per studi meccanicistici in biologia del cancro e in altri disturbi guidati da una disregolazione trascrizionale. MED8 umano rappresenta quindi un nodo utile per interrogare le principali vie di controllo della trascrizione e le dipendenze regolatorie geniche dipendenti dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Med8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MED8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MED8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MED8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Med8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MED8 per lo studio della segnalazione di Med8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MED8 critici per la funzione di Med8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MED8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Med8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Med8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MED8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Med8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Med8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MED8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MED8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.