Med8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404402

概要

MED8は、転写開始および伸長を協調させるために、配列特異的転写因子とRNAポリメラーゼIIをつなぐMediator複合体の保存されたサブユニットであるMed8をコードする。Mediatorの構造的完全性やプロモーター‐エンハンサー間コミュニケーションにおける役割を通じて、MED8は細胞周期進行、分化プログラム、ストレス応答性遺伝子発現の制御に寄与する。Mediator構成要素の撹乱は、ゲノム安定性や代謝状態に影響する転写ネットワークを組み替え得るため、MED8は転写調節異常に起因するがん生物学やその他の疾患の機序研究において重要である。したがってヒトMED8は、中核的な転写制御経路と、状況依存的な遺伝子制御上の依存性を解析するための有用なノードとなる。

Med8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMED8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MED8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MED8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Med8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Med8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MED8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Med8の機能に不可欠なMED8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MED8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Med8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMed8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MED8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Med8 HDRプラスミド（h）および Med8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMED8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMED8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。