Plasmide Double Nickase (h2) MECL-1: sc-402101-NIC-2

Le gène humain PSMB10 code la sous-unité bêta de type 10 du protéasome (MECL-1), un composant catalytique inductible de l’immunoprotéasome qui remplace les sous-unités β constitutives afin de remodeler les préférences de clivage protéolytique lors de la signalisation inflammatoire. MECL-1 soutient le renouvellement des protéines médié par le système ubiquitine–protéasome et renforce le traitement des antigènes présentés par le CMH de classe I, reliant les réponses induites par les interférons à la surveillance immunitaire adaptative et à la modulation des programmes de protéostasie associés à NF-κB. Une dérégulation de la composition ou de l’activité de l’immunoprotéasome est impliquée dans l’altération de la présentation antigénique et l’activation immunitaire chronique observées dans des contextes d’auto-immunité, d’infection et d’échappement immunitaire tumoral. L’édition du gène PSMB10 permet d’interroger les mécanismes à l’origine des répertoires peptidiques dépendants de l’immunoprotéasome, du contrôle de la qualité du protéome sous stress cytokinique et du recâblage des voies immunitaires dans des modèles cellulaires humains.

MECL-1 Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PSMB10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PSMB10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PSMB10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PSMB10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.