Plasmide Double Nickase (h) MDM2: sc-400045-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MDM2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MDM2 Double Nickase (h) et le plasmide MDM2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MDM2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MDM2 Antibody (SMP14): sc-965
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MDM2 | sc-400045-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MDM2 | sc-400045-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MDM2 code une ligase E3 de l’ubiquitine qui agit comme un régulateur négatif central de TP53 en ubiquitinylant p53 et en favorisant son export nucléaire ainsi que sa dégradation par le protéasome. Par cette boucle de rétrocontrôle, MDM2 module les réponses cellulaires aux dommages de l’ADN et au stress oncogénique, influençant les points de contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et la sénescence via le programme transcriptionnel de p53. MDM2 interagit également avec la signalisation RB/E2F et les voies des kinases activées par le stress, intégrant les signaux des facteurs de croissance à la surveillance du génome. Une expression ou une activité dérégulée de MDM2 est fréquemment associée à une altération du contrôle de la voie p53 et est largement étudiée dans le contexte de la biologie tumorale, de l’instabilité génomique et des mécanismes de réponse aux thérapies.
MDM2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MDM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MDM2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MDM2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MDM2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.