Plasmide CRISPR d'Activation (h) MCT9: sc-409073-ACT

SLC16A9 code le transporteur de monocarboxylates 9 (MCT9), un transporteur membranaire de la famille des transporteurs de solutés SLC16, impliqué dans le passage transmembranaire de petits acides organiques et de métabolites apparentés. MCT9 contribue à l’homéostasie métabolique cellulaire en modulant la disponibilité des substrats pour l’oxydation mitochondriale, l’équilibre rédox et, plus largement, les processus de détection des nutriments. Les profils d’expression et les associations génétiques relient SLC16A9 à la régulation systémique des métabolites, notamment à la gestion de l’urate et à la physiologie des transports associés au rein. Par conséquent, SLC16A9 est fréquemment étudié dans le contexte de traits et de troubles métaboliques où la modification des flux de métabolites et de l’activité des transporteurs façonne la fonction des cellules et des tissus.

MCT9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC16A9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MCT9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC16A9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC16A9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MCT9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC16A9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MCT9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MCT9 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC16A9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.