MCR Double Nickase Plasmid (h): sc-400672-NIC

NR3C2 kodiert den Mineralokortikoidrezeptor (MCR), einen ligandaktivierten nukleären Rezeptor, der Mineralokortikoide und Glukokortikoide bindet, um Transkriptionsprogramme zu regulieren, die den epithelialen Natriumtransport, die Kaliumhomöostase, das extrazelluläre Flüssigkeitsvolumen und die Blutdruckregulation steuern. Nach Hormonbindung transloziert der MCR in den Zellkern und moduliert die Genexpression über Hormon-Response-Elemente und Interaktionen mit Koregulatoren; dabei überschneidet er sich mit der MAPK-Signalübertragung und entzündungsassoziierten Transkriptionsnetzwerken. In Niere, Kolon und kardiovaskulären Geweben beeinflusst NR3C2 den ENaC/SGK1-getriebenen Ionentransport und zelluläre Stressantworten und verknüpft so die Rezeptoraktivität mit dem Elektrolytgleichgewicht und Gewebeumbau. Eine Fehlregulation oder Mutation von NR3C2 ist mit Störungen der Mineralokortikoid-Signalgebung assoziiert, darunter Salzverlust-Phänotypen sowie veränderte kardiovaskuläre und renale Physiologie, was seine Bedeutung für mechanistische Studien endokriner und kardiorenaler Signalwege unterstreicht.

MCR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NR3C2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NR3C2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NR3C2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NR3C2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.