Plásmido Doble Nickase (h) MCPIP: sc-401790-NIC

ZC3H12A codifica MCPIP (también conocida como Regnase-1), una RNasa y desubiquitinasa que integra la regulación posranscripcional y la señalización por ubiquitina para frenar la expresión de genes inflamatorios. MCPIP promueve la degradación de determinados ARNm de citocinas y de respuesta inmunitaria, y modula las salidas de las vías NF-κB y MAPK, dando forma a la activación de macrófagos, las respuestas de células T y los programas transcripcionales inducidos por estrés. Al controlar la estabilidad del ARN y la ubiquitinación de proteínas de señalización, MCPIP contribuye a la homeostasis inmunitaria y puede influir en fenotipos asociados a la inflamación crónica observados en contextos de investigación sobre cáncer, autoinmunidad y enfermedades cardiometabólicas. Por ello, la MCPIP humana se estudia con frecuencia en señalización inmunitaria innata, recambio de ARN y remodelación celular impulsada por la inflamación.

MCPIP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ZC3H12A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ZC3H12A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ZC3H12A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ZC3H12A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.