Plasmide CRISPR d'Activation (h) MCPIP: sc-401790-ACT

ZC3H12A code MCPIP (également appelé Regnase-1), une endoribonucléase se liant à l’ARN qui limite l’expression des gènes inflammatoires en favorisant la dégradation des ARNm de cytokines et de chimiokines et en modulant la biogenèse des microARN. MCPIP intègre des signaux en aval des récepteurs de l’immunité innée et des voies des cytokines, notamment les cascades NF-κB et MAPK, afin d’orienter l’activation des macrophages, les réponses des lymphocytes T et la résolution de l’inflammation. En régulant la stabilité des transcrits et les programmes de différenciation des cellules immunitaires, ZC3H12A est impliqué dans la dérégulation de l’homéostasie immunitaire observée dans les contextes de maladies auto-immunes et inflammatoires chroniques. Son activité recoupe également les réponses au stress cellulaire et des voies de signalisation liées à l’apoptose, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des lésions tissulaires associées à l’inflammation et des interactions tumeur–système immunitaire.

MCPIP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZC3H12A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MCPIP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZC3H12A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZC3H12A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MCPIP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZC3H12A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MCPIP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MCPIP dans les cellules tumorales présentant une expression de ZC3H12A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.