Plasmide Double Nickase (h) MCH-1R: sc-402512-NIC

Le récepteur 1 de l’hormone de concentration de la mélanine (MCHR1) code MCH-1R, un RCPG de classe A qui assure la transduction du signal du neuropeptide MCH dans le système nerveux central et les tissus périphériques. Après liaison du ligand, MCH-1R se couple principalement aux voies Gi/o et Gq pour moduler les niveaux d’AMPc, les flux de calcium intracellulaire et la signalisation MAPK/ERK en aval, intégrant des signaux neuroendocriniens à l’excitabilité cellulaire et aux réponses transcriptionnelles. Ce récepteur participe à des circuits qui contrôlent l’équilibre énergétique, le comportement alimentaire, l’éveil et les processus liés à la récompense, ce qui l’associe à des études mécanistiques sur la dérégulation métabolique et des phénotypes neuropsychiatriques. Des altérations de la signalisation de MCH-1R ont été étudiées dans le contexte de la biologie de l’obésité ainsi que des voies associées à l’humeur et à l’anxiété, faisant de MCHR1 une cible pertinente pour l’interrogation de voies dans des modèles cellulaires neuronaux et métaboliques.

MCH-1R Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MCHR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MCHR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MCHR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MCHR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.