Plásmido Doble Nickase (h) MBL-C: sc-403131-NIC

MBL2 codifica la lectina de unión a manosa (MBL‑C), una molécula soluble de reconocimiento de patrones que inicia la vía de las lectinas del complemento al unirse a motivos de carbohidratos microbianos y activar las proteasas MASP. Mediante la opsonización y la amplificación de la cascada del complemento, la MBL‑C contribuye a la vigilancia inmunitaria innata, a la eliminación de material apoptótico y a la modulación del tono inflamatorio en superficies mucosas y a nivel sistémico. La variación en la expresión de MBL2 o en su capacidad de oligomerización se ha asociado con una susceptibilidad alterada a infecciones y con respuestas inflamatorias desreguladas, y con frecuencia se examina como un modificador de fenotipos inmunitarios en contextos de sepsis, trastornos autoinmunes y enfermedades inflamatorias crónicas. Como componente circulante producido principalmente por los hepatocitos, la MBL‑C también ofrece un indicador accesible para estudiar mediadores inmunitarios secretados, la dinámica de activación del complemento y las vías de interacción huésped–patógeno.

MBL-C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MBL2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MBL2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MBL2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MBL2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.