Mast Cell Tryptase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400887-ACT

TPSAB1は、肥満細胞トリプターゼ（トリプターゼ-α/β）をコードしており、これは分泌型のセリンプロテアーゼです。肥満細胞の顆粒内に貯蔵され、脱顆粒時に放出されます。肥満細胞トリプターゼは、細胞外マトリックスのタンパク質分解を介したリモデリングに関与し、プロテアーゼ活性化受容体を介してシグナルを伝達することで、炎症カスケード、白血球の動員、血管透過性を調節します。サイトカインネットワークや組織微小環境の動態に影響を与えることから、TPSAB1は免疫学およびバリア組織生物学において、肥満細胞の活性化や存在量の指標として一般的に用いられます。肥満細胞トリプターゼ活性の変化や肥満細胞浸潤パターンは、アレルギー、喘息、慢性炎症性疾患、線維化に関連する過程、ならびに腫瘍関連炎症において研究されています。

Mast Cell Tryptase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TPSAB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mast Cell Tryptase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TPSAB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTPSAB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mast Cell Tryptaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTPSAB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMast Cell Tryptase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTPSAB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMast Cell Tryptase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。