Plásmido Doble Nickase (h) Maspin: sc-416693-NIC

SERPINB5 codifica Maspin, un miembro no clásico de la familia de inhibidores de proteasas de serina que actúa como regulador dependiente del contexto de la adhesión, la motilidad y las interacciones de las células epiteliales con la matriz extracelular. Maspin influye en la remodelación del citoesqueleto y en programas de señalización célula–matriz vinculados a la migración y la invasión, y se ha descrito que modula las respuestas al estrés oxidativo y la regulación asociada a la cromatina mediante interacciones con socios nucleares y citoplasmáticos. Los cambios en la expresión y la localización subcelular de SERPINB5 se han asociado con fenotipos de progresión tumoral en múltiples tipos de tejido, lo que la convierte en un nodo molecular útil para estudiar mecanismos del comportamiento celular relacionado con la metástasis. Como gen vinculado a biomarcadores en biología del cáncer, SERPINB5 se analiza con frecuencia en modelos de diferenciación epitelial, invasión y remodelación del microambiente.

Maspin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SERPINB5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SERPINB5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SERPINB5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SERPINB5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.