MARCKS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400837

概要

MARCKS（ミリストイル化アラニンリッチCキナーゼ基質）は、膜結合性のアクチン制御タンパク質であり、プロテインキナーゼC（PKC）の代表的な基質として機能するとともに、細胞膜におけるホスファチジルイノシトール4,5-ビスリン酸（PIP2）の利用可能性を調節します。リン酸化依存的に膜区画と細胞骨格区画の間を往復することで、MARCKSはアクチンフィラメントの構築、細胞形態、接着、運動性、小胞輸送、神経突起伸長に影響を及ぼします。MARCKSは、PKC、カルシウム／カルモジュリン制御、ホスホイノシチド動態に関連するシグナル伝達ネットワークに関与し、細胞骨格リモデリングと膜シグナルを協調的に制御します。MARCKSの発現やリン酸化の破綻は、遊走・浸潤表現型の変化と関連づけられており、がん生物学、神経発生過程、炎症性シグナル伝達などの文脈で研究されています。

MARCKS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMARCKS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MARCKS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MARCKSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MARCKSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MARCKSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MARCKS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MARCKSの機能に不可欠なMARCKSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MARCKSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MARCKS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMARCKS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MARCKS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MARCKS HDRプラスミド（h）および MARCKS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMARCKSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMARCKS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。