MARCH8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405928

Visão geral

MARCH8 (membrane associated ring-CH-type finger 8) codifica uma ligase E3 de ubiquitina que se localiza em compartimentos endossomais e na membrana plasmática e regula a renovação e o tráfego, dependentes de ubiquitinação, de múltiplas proteínas de membrana. Ao controlar a endocitose, o direcionamento lisossomal e a disponibilidade na superfície de receptores e transportadores, a MARCH8 influencia a apresentação de antígenos, a sinalização imune e as vias de controle de qualidade de proteínas de membrana. Sua atividade tem sido associada à modulação da incorporação de glicoproteínas do envelope viral e à restrição da infectividade de partículas virais, destacando papéis na interface entre a defesa do hospedeiro e a biologia de membranas. Programas de tráfego mediados por ubiquitina envolvendo a MARCH8, quando desregulados, são relevantes para estudos de disfunção imune e de interações patógeno–hospedeiro em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MARCH8 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MARCH8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MARCH8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MARCH8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MARCH8.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MARCH8 para a investigação da sinalização de MARCH8, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MARCH8 críticos para a função MARCH8
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MARCH8 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MARCH8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MARCH8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MARCH8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MARCH8 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MARCH8 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MARCH8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MARCH8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.