Plásmido CRISPR de Activación (h) MAO-B: sc-401732-ACT

MAOB codifica la monoamino oxidasa B (MAO‑B), una enzima dependiente de flavina localizada en la membrana externa mitocondrial que cataliza la desaminación oxidativa de aminas biógenas y dietarias. Al regular el catabolismo de la dopamina, la fenetilamina y otras monoaminas relacionadas, la MAO‑B influye en la homeostasis de los neurotransmisores y genera peróxido de hidrógeno como subproducto, lo que vincula su actividad con el equilibrio redox mitocondrial y las vías de estrés oxidativo. La función de la MAO‑B se cruza con la señalización monoaminérgica, el metabolismo mitocondrial y las respuestas celulares al estrés en tejidos neurales y periféricos. La alteración de la expresión de MAOB o de la actividad de la MAO‑B se ha asociado con procesos neurodegenerativos y neuropsiquiátricos, así como con fenotipos moleculares relacionados con la inflamación y el envejecimiento, lo que respalda estudios mecanísticos del recambio de monoaminas y de procesos dependientes de ROS.

MAO-B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAOB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAO-B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAOB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAOB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAO-B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAOB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAO-B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAO-B en células tumorales con expresión de MAOB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.