Plásmido CRISPR de Activación (h) MALT1: sc-400791-ACT

La MALT1 humana (proteína 1 de translocación del linfoma del tejido linfoide asociado a mucosas) es una paracaspasa que funciona como un nodo central de señalización aguas abajo de los receptores de antígeno en los linfocitos, integrando señales del complejo CARD11–BCL10–MALT1 (CBM) para impulsar la activación canónica de las vías NF-κB y MAPK. Más allá de su función como andamio, la proteasa MALT1 escinde sustratos selectos para modular la activación de células T y B, la producción de citocinas y los programas de supervivencia. La señalización desregulada de MALT1 se asocia con una activación inmune aberrante y está implicada en la biología de las neoplasias linfoides mediante programas transcripcionales dependientes de NF-κB alterados. Por ello, modular la expresión de MALT1 resulta útil para diseccionar la transcripción dependiente de señales, el cableado de las vías de receptores inmunes y la regulación de genes inflamatorios específica del contexto.

MALT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MALT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MALT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MALT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MALT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MALT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MALT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MALT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MALT1 en células tumorales con expresión de MALT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.