Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAGOH: sc-402667-ACT

MAGOH (homologue de mago, sous-unité du complexe de jonction des exons) est une protéine de liaison à l’ARN conservée qui agit comme un composant central du complexe de jonction des exons, coordonnant la régulation post-transcriptionnelle des gènes. Elle participe à l’épissage des ARNm, à leur export, à leur localisation et à la dégradation des ARNm via le mécanisme de surveillance « nonsense-mediated decay » (NMD), influençant ainsi le contrôle qualité du transcriptome et l’intégrité du protéome. Par ces processus, MAGOH contribue à la progression du cycle cellulaire et aux programmes de neurodéveloppement en modulant l’expression de gènes impliqués dans la prolifération et la différenciation. Des altérations de dosage ou une dysrégulation des composants du complexe de jonction des exons, dont MAGOH, ont été associées à des mécanismes pathogènes dans des troubles du développement ainsi qu’à des modifications de l’expression génique liées au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier le métabolisme de l’ARN dans des contextes pathologiques.

MAGOH Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAGOH sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAGOH Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAGOH dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAGOH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAGOH. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAGOH natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAGOH au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAGOH dans les cellules tumorales présentant une expression de MAGOH silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.