Plásmido CRISPR de Activación (m) MafG: sc-421533-ACT

Mafg codifica MafG, un factor de transcripción de la familia small Maf con dominio básico de cremallera de leucina (bZIP) que forma heterodímeros con proteínas CNC como NFE2L2/NRF2 para regular la expresión génica dependiente del elemento de respuesta antioxidante (ARE). En células de ratón, MafG contribuye a la homeostasis redox, al metabolismo de xenobióticos y a la adaptación celular al estrés oxidativo y electrofílico, configurando programas transcripcionales vinculados al metabolismo del glutatión y a enzimas de detoxificación. MafG también influye en la biología hematopoyética y de las células inmunitarias mediante el control transcripcional de genes de linaje y de respuesta al estrés. La desregulación de la actividad del eje small Maf/NRF2 se asocia con señales alteradas de estrés oxidativo y estados inflamatorios, lo que convierte a Mafg en un nodo útil para estudios mecanísticos de vías de respuesta al estrés.

MafG El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mafg sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MafG El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mafg en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mafg, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MafG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mafg y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MafG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MafG en células tumorales con expresión de Mafg silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.